Маленькая глава из курсовой работы, я надеюсь эта информация будет кому-нибудь полезна.
Именно так мы получаем корм для рачков… пусть эти маленькие создания будут счастливы.
Важной частью эксперимента является подготовка и поддержание кормовой базы эксперимента, которой является хлорелла. Культивирование хлореллы состоит из нескольких важных этапов, прохождение которых в рекомендованной последовательности позволяет сэкономить время и силы:
· предварительная навеска солей для новой культуры;
· центрифугирование;
· подготовка аквариума со свежей хлореллой;
· расчёт концентрата клеток средствами авторской программы.
Предварительная навеска солей
Для культивирования хлореллы необходима питательная среда, для чего в дистиллированной воде разводятся соли, входящие в состав этой среды. Для разных объёмов необходимо разное количество солей, что и учитывается в таблице ниже.
Таблица Навески солей для соответствующих объёмов воды
Соль (г): | Объём хлореллы (л): | |||
0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,0 | |
Мочевина | 2,10 | 4,2 | 8,4 | 16,8 |
KH2PO4 | 1,00 | 2,0 | 4,0 | 8,0 |
MgSO4 | 1,25 | 2,5 | 5,0 | 10,0 |
KHCO3 | 0,50 | 1,0 | 2,0 | 4,0 |
Трилон Б | 0,0015 | 0,003 | 0,006 | 0,012 |
Каждая соль в совокупности с другими солями составляет комплекс элементов, необходимых водоросли для быстрого наращивания биомассы.
Навески солей для новой культуры предварительно навешивали и расфасовывали по мерным стаканам, для экономии времени при проведении центрифугирования.
Центрифугирование и подготовка аквариума со свежей хлореллой
Процесс центрифугирования – это два параллельных процесса, которые очень важно согласовать во времени, чтобы не тратить его на ожидание завершения одного из этапов. Так, весь процесс можно разбить на этапы, ключевыми точками в котором являются начало и окончание цикла центрифугирования, между которыми необходимо быстро и тщательно решить ряд задач.
Подготавливаем центрифугу к началу центрифугирования:
· Включаем питание
· Выставляем значение количества оборотов в минуту
o Значения от 500 до 2500
o Мы используем скорость в 1200 оборотов
· Выставляем значение таймера
o Значение от 5 до 15 минут
o Мы используем время 5 минут
Таким образом центрифуга готова к работе и нужно срочно подготовить для неё хлореллу, для чего:
· Берём хлореллу из люминостата, воронку и мельничный газ (пора диаметром) и мерный сосуд на 1 литр
· Пропускаем хлореллу через мельничный газ
· Доводим объём хлореллы (~400 мл) до 1000 мл дистиллятом
· Берём мерные стаканчики (3-4-8 по 100 мл) и разливаем раствор хлореллы и солей по 100 мл
· Устанавливаем в центрифугу и стартуем машину
· Наливаем требуемое количество дистиллята
· Кипятим дистиллят в чайнике
· Промываем и стерилизуем мельничный газ и воронку, далее убираем их в стерильный шкаф
· Выставляем оставшееся оборудование для работы
o Стаканчики с предварительной навеской солей
o Стеклянная палочка для размешивания солей
o Сосуд для дистиллята требуемого объёма
§ Объём зависит от имеющегося количества соли, зависящего от требуемого объёма проращиваемой хлореллы
Теперь необходимо до остановки центрифуги выполнить следующее:
· Налить необходимое количество дистиллята для нового раствора солей (см таблицу выше)
· Растворить соли
· Пока идёт растворение солей:
o Вымыть и простерилизовать
§ Аквариум
§ Продувку
§ Крышку
· Добавить в аквариум средство для водорослей.
· Влить в аквариум растворённые соли, омыть стаканчики оставшимся дистиллятом и влить в аквариум.
Когда центрифугирование завершается, останавливаем работу и слив осадок центрифугируем оставшуюся хлореллу разведённую дистиллятом. Таким образом, мы отмываем хлореллу дистиллированной водой от солей, в которых она проращивалась в люминостате и от частиц мусора и бактерий. После старта центрифуги доделываем незавершённую работу.
Получили концентрат хлореллы. Добавляем до светло-зелёной окраски концентрат хлореллы в новый раствор и доводит оставшийся концентрат до 100 мл дистиллятом. Оставляем настаиваться на 2 часа, просчитываем клетки и убираем в холодильник.
Культуру хлореллы содержим в аквариуме (500 мл), находящемся в люминостате, при постоянном освещении и температуре ~20ºС. К аквариуму подключаем аквариумный компрессор, нагнетающий воздух через мерную пипетку, и оставляем для проращивания новой порции водоросли.
Центрифугирование хлореллы проводили с целью получения концентрата её клеток, для использования в качестве корма в эксперименте с фиксированным значением количества клеток на единицу объёма среды, в которой живут организмы. Во время центрифугирования происходит отделение крупных клеток от грязи, микроорганизмов и более мелких клеток.
В работе использовалась стерильная посуда, предварительно облучаемая коротковолновым УФ. Перед началом работы руки моют с мылом. Для поддержания чистоты и стерильности оборудования после использования приборы (пробирки, колбы, центрифужные стаканчики) должны быть тщательно вымыты проточной водой и обработаны 900С дистиллированной водой.
Комментариев нет:
Отправить комментарий